کلونینگ و بیان ژن نانوبادی علیه انتروتوکسین b باکتری استافیلوکوکوس اورئوس

Authors

زهرا توسلی

zahra tavassoli department of biotechnology, malek ashtar university, tehran, iranپژوهشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران، ایران حمیده روحانی نژاد

hamideh rouhani nejad department of biotechnology, malek ashtar university, tehran, iranپژوهشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران، ایران جلیل فلاح مهرآبادی

jalil fallah mehrabadi the lister laboratory of microbiology, tehran, iranآزمایشگاه میکروب شناسی لیستر، تهران، ایران

abstract

زمینه و هدف: باکتری استافیلوکوکوس اورئوس با ترشح انتروتوکسین های متعدد باعث بیماری های مختلف می شود، به همین دلیل روش های مؤثر و آسان شناسایی انتروتوکسین­ها موردنیاز است. امروزه غالباً از روش های ایمونوشیمیایی برمبنای آنتی بادی های مونوکلونال استفاده می شود. در سرم خون خانواده شترسانان آنتی بادی های زنجیره سنگین یافت شده که vhh یا نانوبادی نامیده می شوند. خصوصیات منحصربه فرد این آنتی بادی ها از قبیل اتصال به مولکول های کوچک نظیر توکسین ها، آن ها را کاندیدهای جذابی برای توسعه ترکیبات دارویی نموده است. برای دستیابی به مولکول vhh علیه انتروتوکسین b استافیلوکوکوس تحقیق حاضر انجام شده است. مواد و روش ها: غنی سازی کتابخانه ی فاژی به منظور جداسازی نانوبادی های اختصاصی علیه توکسین در کارهای قبل انجام شده بود. در ادامه وکتور pcantab 5e  حاوی vhh از باکتری e.coli سویه xl1blue، استخراج و پس از انجام واکنش pcr با پرایمرهای مربوطه، ساب کلونینگ در وکتور بیانی (+)pet21a با مکان های برش ndei و xhoi صورت گرفت. ترانسفورماسیون وکتور درون باکتری e.coli سویه بیانی (de3) bl2i انجام شد. سپس سلول ها تحت القای iptg قرار گرفتند و زمان و شرایط تولید بهینه گردید، درنهایت بیان پروتئین توسط تکنیک sds-page و وسترن بلات مورد ارزیابی قرار گرفت. نتایج: برای تأیید کلونینگ ژن نانوبادی درون وکتور pet21a(+)، توالی نوکلئوتیدی ژن آنالیز و ترانسفورم به باکتری e.coli سویه de3))bl21 با موفقیت انجام شد. پس از القاء، پروتئین فعال درون سلول توسط روش sds-page مشاهده و توسط لکه گذاری وسترن تأیید شد. نتیجه گیری: در این تحقیق کلونینگ، ساب کلونینگ و بیان ژن نانوبادی انجام شد. تولید این پروتئین نوترکیب می تواند گامی مهم در جهت توسعه روش های درمانی جدید و یا تولید واکسن علیه انتروتوکسین b باکتری استافیلوکوکوس اورئوس بردارد.

Upgrade to premium to download articles

Sign up to access the full text

Already have an account?login

similar resources

کلونینگ و بیان ژن نانوبادی علیه انتروتوکسین B باکتری استافیلوکوکوس اورئوس

زمینه و هدف: باکتری استافیلوکوکوس اورئوس با ترشح انتروتوکسین‌های متعدد باعث بیماری‌های مختلف می‌شود، به همین دلیل روش‌های مؤثر و آسان شناسایی انتروتوکسین­ها موردنیاز است. امروزه غالباً از روش‌های ایمونوشیمیایی برمبنای آنتی‌بادی‌های مونوکلونال استفاده می‌شود. در سرم خون خانواده شترسانان آنتی‌بادی‌های زنجیره سنگین یافت شده که VHH یا نانوبادی نامیده می‌شوند. خصوصیات منحصربه‌فرد این آنتی‌بادی‌ها از ...

full text

بیان نوترکیب انتروتوکسین استافیلوکوکوس اورئوس تیپ B به عنوان کاندیدای واکسن

زمینه و هدف: استافیلوکوکوس اورئوس(Staphylococcus aureus)، کوکسی گرم مثبتی است که می­تواند بیماری های مختلفی چون مسمومیت­های غذایی، شوک های مخاطره آمیز و ... را به وجود آورد. از مهم­ترین سموم تولید شده توسط این باکتری، انتروتوکسین نوع B یکی از معمولترین و مهم­ترین توکسین­های یافت شده و یک سوپر آنتی ژن می باشد. هدف از انجام این تحقیق همسان سازی و بیان این پروتئی...

full text

شناسایی ژن های انتروتوکسین استافیلوکوکوس اورئوس با استفاده Multiplex PCR

سابقه و هدف: استافیلوکوکوس اورئوس یکی از مهمترین عوامل مسمومیت غذایی در جهان می باشد. در تحقیقات مختلف مشخص گردیده است که 18-15 درصد سویه های استافیلوکوکوس که از منابع مختلف جدا می شود قادر به تولید انتروتوکسین می باشند که فاکتور اصلی مسمومیت می باشند. هدف از تحقیق حاضر شناسایی ژنهای انتروتوکسین نظیر: (femA،see ،sed ،sec ،seg ،seb، sea) در استافیلوکوکوس اورئوس که با استفاده از روش PCR چندگانه ا...

full text

تعیین ژن های انتروتوکسین نوع a-e باکتری استافیلوکوکوس اورئوس

چکیده مقدمه: حاملین سالم شاغل در بیمارستان از دلایل اصلی انتشار عفونت استافیلوکوکی در بیماران محسوب می شوند. این باکتری با ترشح سموم مختلف از جمله انتروتوکسین شرایط تهاجم به میزبان را فراهم می آورد. شناسائی ویژگی ها و تفاوت های استافیلوکوکوس اورئوس های جدا شده از کارکنان بیمارستان ها به عنوان حاملین سالم و انواع جدا شده از بیماران بر مبنای دارا بودن ژن انتروتوکسین sea, seb, sec,s sed) وsee ) از...

full text

کلونینگ و تعیین توالی ژن ساکول استافیلوکوکوس اورئوس

زمینه و اهداف: عفـونت های طبیعی استافیلـوکوکوسی و واکسن های حـاوی سلول کامـل باکتـری توانایی کمی در برانگیختـن آنتـی بادی های میزبان دارند. در حالی که آنتی بادی های اختصاصی بر علیه آنتی ژن های نوترکیب استافیلوکوکوسی بسیار محافظت کننده هستند. ساکول آنتی ژنی است که به تازگی شناخته شده است و اطلاعات اندکی در مورد ویژگی های ساختاری و ایمونولوژیکی آن وجود دارد. هدف این مطالعه کلون کردن و تعیین توالی...

full text

My Resources

Save resource for easier access later


Journal title:
مجله دانشگاه علوم پزشکی فسا

جلد ۶، شماره ۴، صفحات ۴۹۶-۵۰۳

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023